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        分散酶II可應(yīng)用于組織的解離

        更新時(shí)間:2022-06-01      點(diǎn)擊次數(shù):1329
        分散酶II(中性蛋白酶)是一種氨基酸內(nèi)肽酶,可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見于膠原蛋白。分散酶II 具有溫和的蛋白水解作用,可用于原代細(xì)胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶II 相對溫和,在生理溫度和 pH 值下具有良好的解離能力,通??删S持細(xì)胞膜完整性。

        分散酶II能快速有效且溫和的破壞組織細(xì)胞外基質(zhì)釋放單細(xì)胞培養(yǎng)物(原代細(xì)胞培養(yǎng)物)或收集已培養(yǎng)的細(xì)胞將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基質(zhì)上(傳代培養(yǎng))。

        分散酶II可應(yīng)用于組織的解離,具體步驟如下:

        1、用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊。

        2、用無菌PBS清洗組織塊。

        3、向上述組織塊中加入Dispase II溶液( 工作濃度為0.6-24U/ml),并確保組織塊全部浸沒于Dispase溶液中。

        4、37°C孵育,孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。(若*一次使用該酶,可通過細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定需要的總孵育時(shí)間。一般對于較難解離組織,1h即可達(dá)到分離目的,但更長時(shí)間(如數(shù)小時(shí))的孵育也不會明顯影響細(xì)胞活性。)

        5、如有需要,可將上述消化產(chǎn)物通過無菌不銹鋼網(wǎng)篩過濾,以分開單細(xì)胞與殘留的組織塊。或者待大塊組織沉淀后輕輕倒出上層細(xì)胞,若是需要,換用新鮮dispase溶液以進(jìn)一步解離殘留組織。

        6、離心沉淀細(xì)胞,倒掉酶溶液;

        7、用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。

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